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抗熒光衰退封片劑Citifluor?

  一系列特意為免疫熒光反應(yīng)封片設(shè)計的產(chǎn)品,獨特的配方使得染料的熒光不再衰退。常用的抗熒光衰退封片劑有AF1AF2、AF3、AF4AF87、AF100、AF200、AF300、CFM-1CFM-2等等。其中部分產(chǎn)品含DAPI,可襯染細(xì)胞核或襯染DNA的實驗。

關(guān)于抗熒光淬滅劑,常見的三種:酚型的沒食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)、胺型的對苯二胺p-Phenylenediamine (PPD)、胺型的 1,4-Diazabicyclo-octaneDABCO)三乙烯二胺。熒光淬滅的基本理論是這樣滴:組織切片中的普通溶解氧在激發(fā)態(tài)時變成了單線態(tài)氧,單線態(tài)氧類似氧自由基,這個東西就是熒光淬滅的主要元兇,我們加入的抗淬滅劑主要是與這個元兇反應(yīng),直接清除單線態(tài)氧。注意,封片劑中加入抗淬滅劑,往往在激發(fā)的初級階段使熒光總量降低,還有與DNA結(jié)合染料反應(yīng)的風(fēng)險??纯催@三種試劑的優(yōu)缺點吧:PPD可以與花菁染料反應(yīng)(尤其Cy2),故這類染料封片考慮不用含PPD的封片劑;NPG,無毒,活細(xì)胞熒光染色首選這類封片劑,但是NPG對細(xì)胞凋亡的過程有所干涉,進(jìn)行此類研究的同學(xué)多注意啦,盡量避開含有NPG的封片劑;DABCO不像PPD那樣有效且毒性低,可以用于活細(xì)胞,但是與NPG一樣,對細(xì)胞凋亡的過程有所干涉。

大量的封片劑堆砌在這里,怎樣快速的找到自己需要的那個呢?簡單的思路是:

第一步,凝固型還是非凝固型?凝固起來貯存和拿取很方便,要考慮的是凝固過程中組織片的收縮以及需要脫水步驟的收縮。非凝固型需要考慮的是封片劑的揮發(fā)和側(cè)漏,當(dāng)然需要蓋玻片啦(有時還需要硅膠密封墊spacer),而且往往蓋玻片還需要密封起來,常用指甲油、牙科蠟、VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在蓋玻片周圍涂一下,指甲油干固所需時間較長,有污染鏡頭的風(fēng)險;牙科蠟在常溫拿下能較快固化;VALAP (equal mixture of Vaseline, lanolin, and paraffin mixed on a heating plate 60°C)在活細(xì)胞封固中很常用。

第二步:需要甘油基(水溶性)的還是非甘油基(脂溶性)的?甘油可以與任何比例的水混溶,可以與乙醇相溶,但不與油混溶。知道這些,選擇起來就簡單多了。你的組化反應(yīng)體系是怎樣的?含水,就選甘油基(水溶性的)的。經(jīng)過嚴(yán)格脫水處理,就選非甘油基的(油溶性的)。

第三步、封片劑的折射率。染色的片子用封片劑選擇折射率在152154之間透明度最佳;未染色組織最好用有很高或很低折光率的封片劑封固,這樣的封片劑可以消除球面相差,獲得最佳的圖像。

介紹用到的成膜劑:

聚乙烯醇poly (vinyl alcohol):有機高分子物質(zhì),無毒,可溶于水,常用的一種成膜劑。根據(jù)其聚合度和醇解度的不同編為不同的號碼,例如Mowiol® 4-88。PVA也可以加入其他物質(zhì)或者反應(yīng)進(jìn)行改性處理, 例如Permafix-1就是改性的PVA。

聚乙烯吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)簡稱PVP,是一種非離子型高分子化合物,也是常用的成膜劑。

 

甘油基

非甘油基

非凝固型

AF1                CFM-1+Antifadent

AF1+DAPI          CFM-1

AF2                CFM-2

AF4                CFMR-2

AFP1               CFM-3

AF3

AFR3

AF87

凝固型

AF200+Tris MWL 4-88

AF300+Tris MWL 4-88

AF200+CFPVOH

AF300++CFPVOH

PVP+Antifadent(折射率1.5)

CFPVOH+Antifadent

CFPVOH+AF100

PF+AF100

 

 

產(chǎn)品選購指南:

l  AF1:基本成分是甘油、PBS緩沖液、抗熒光淬滅劑(DABCO)、其它成分等,折射率1.46,PH10左右,適于用于檢測浸泡在甘油中的組織切片、死細(xì)胞、 FISH (including CARD-FISH)等的封片。

l  AF2:基本成分是甘油、抗熒光淬滅劑(胺型的)、其它成分等,沒有自身的緩沖液。折射率1.47,該產(chǎn)品的優(yōu)勢在沒有自身緩沖液,可以與任意其它緩沖液相容。

l  AF3:基本成分是PBS緩沖液、抗熒光淬滅劑(胺型的)、其它成分,折射率1.34,對于活細(xì)胞檢測特別適用(沒有甘油的)。

l  AFR3: 基本成分是PBS緩沖液、一種最新型的抗熒光淬滅劑(非胺非酚型)、其他成分等。

l  AF4:又稱Glycerol/n-propyl gallate mounting medium封片劑,添加的抗熒光衰退劑是沒食子酸丙酯n-Propyl gallate (NPG)。

l  AF87:特別的地方是含有無熒光浸油,這是為在高倍鏡下觀察特別設(shè)計的封片劑,對于DAPI染色特別有用(DAPI 在甘油基封片劑中有疏散的傾向)。

l  AF100:基本成分是PBS緩沖液、抗熒光衰退劑、其他成分等,這是一款不含甘油的封片劑,需要與CFPVOH溶液配套使用。需要預(yù)先混合AF100CFPVOH溶液,用多少混合多少,混合后10小時內(nèi)用完。該封片劑的折射率1.34-1.35.

l  AF200:AF100類同,不同的是,AF200是甘油基的,胺基型抗熒光衰退劑,適于花青素、Alexa、Hoeches等封片。

l  AF300:AF100類同,不同的是,AF300是甘油基的,酚基型抗熒光衰退劑。

l   CFM系列的封片劑的折射率均是1.52,等于或者近似等于所用載片和蓋片玻璃的折射率,這對完美圖像的獲得很有幫助。主要于激光共聚焦顯微鏡下使用,或者高倍鏡需要浸油的情況下來替代浸油。CFM-1pH6.5,.CFM-1 Plus AntifadentPH值大約10 CFM-2pH of~8.5,CFM-3PH值接近中性。

訂購信息:

貨號

產(chǎn)品名稱

規(guī)格

17970-25

Citifluor™ AF1

25 ml

17970-125

Citifluor™ AF1+DAPI

15ml

17971-25

Citifluor™ AF2

25 ml

17972-25

Citifluor™ AF3

25 ml

17973-10

Citifluor™ AFR3

10ml

17973-25

Citifluor™ AF4

25ml

17976-10

Citifluor™ AF87

10 ml

17977-10

Citifluor™ AF200

10ml

17977-25

Citifluor™ AF300

10ml

17977-50

Citifluor™ PVP-1

25ml

17977-100

Citifluor™ PVP-1+antifadent

25ml

17977-150

Citifluor™ MWL4-88

25ml

17978-35

Set of Citifluor™ CFPVOH and AF100

25 ml+ 5 ml

17980-10

Citifluor™ CFM-1

10ml

17981-10

Citifluor™ CFM-1+antifadent

10ml

17982-10

Citifluor™ CFM-2

10ml

17979-10

Citifluor™ CFMR-2

10ml

17979-20

Citifluor™ CFM-3

10ml

17979-50

Citifluor™ PF

10ml

 

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