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問: 中性封片劑(DPX)和水溶性封片劑有何區(qū)別?免疫熒光和普通免疫組化用的一樣嗎?
答: 中性封片劑DPX一般為PH 7.0左右的油性物質(zhì),如中性樹酯,用二甲苯調(diào)成合適濃度后用于封片,但標(biāo)本要經(jīng)過脫脂、脫水等處理,可用于長期保存切片等。水溶性一般為50%左右的甘油,用于短期保存染色的切片,如熒光染色。一般說來,熒光染色和一般免疫組化的封片劑無區(qū)別,但由于熒光在堿性環(huán)境中能激發(fā)更綠的光,所以,用于封熒光染色的溶劑可調(diào)PH在8-10 之間。
答: 對不同顯色底物所用的封片劑也有所不同:
如辣根過氧化物酶HRP的作用底物為DAB或AEC.在DAB顯色后再用蘇木素或甲級綠甲基藍(lán)復(fù)染之后,以中性封片劑封片;而AEC顯色后用蘇木素或甲基藍(lán)復(fù)染,然后是以水性封片劑封片。
堿性磷酸酶AP的顯色底物包括BOIB/NBT或FAST-RED等。NBT顯色后復(fù)染與DAB同,也用DPX封片,而FAST-RED顯色則與AEC相同,也是用水性封片劑封片。
問:DPX用量?是否等二甲苯未揮發(fā)干就封片?樹膠是否常溫保存?蓋玻片封片前為何要加熱?
答:
1 DPX為中性封固劑,用于多種染色方法勻不易褪色,但組織收縮較明顯,故應(yīng)盡量使其為均勻的一薄層。
2不干就封是對的,干封主要是有人怕聞二甲苯,從100%乙醇中出來不過二甲苯,干燥后再封。形態(tài)不好。
3樹膠不用在冰箱保存。
4蓋玻片封片前加熱可防止白霧的產(chǎn)生。
問:在塑料培養(yǎng)瓶上作原位免疫組化,但是用丙酮固定后出現(xiàn)相似相溶,請問用什么方法固定細(xì)胞,而避免相似相溶?
答:塑料培養(yǎng)瓶上作原位免疫組化有幾個問題:
1.固定,丙酮不行,可用酒精或甲醇,會好一些;
2.封片,不能用DPX等脂溶性封片劑(也會溶),只有用甘油等水溶性封片劑;
3.攝像,塑料培養(yǎng)瓶上作原位免疫組化拍攝出來的照片質(zhì)量不太好,因為塑料本身透光度不好,再加上固定時又會降低塑料透光度。
推薦:使用細(xì)胞培養(yǎng)片,如96孔板細(xì)胞培養(yǎng)片等,解決以上問題。且方便操作。
電話 010-52571502 010-51248120 郵箱 hedebio@163.com |
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